> Определение желчных пигментов в моче

Данная информация не может использоваться при самолечении!
Обязательно необходима консультация со специалистом!

Определение желчных пигментов в моче

Желчными пигментами называют продукты распада и преобразования гемоглобина. При разрушении эритроцитов из гемоглобина образуется свободный билирубин, который при попадании в печень связывается с глюкуроновой кислотой. В результате образуется связанный билирубин. Билирубин, выделяясь с желчью в кишечник, подвергается воздействию микрофлоры и пищеварительных ферментов, после чего из него образуется уробилиноген. Это вещество в незначительных количествах всасывается в кровь и выделяется с мочой.

Для чего определяют желчные пигменты в моче

Смысл определения концентрации пигментов в моче заключается в том, что они имеют разную растворимость и в различной степени способны фильтроваться почками. То есть изменение концентрации пигмента в моче свидетельствует об определенной патологии.

Свободный билирубин в норме не фильтруется почками, через почечный барьер проникает только связанная его форма. Появление этого желчного пигмента в моче говорит о резком росте его концентрации в плазме крови, что является признаком болезни печени или желчного пузыря.

Кто назначает анализ, и где его можно сдать

Назначают этот анализ врачи-терапевты, инфекционисты, врачи-гастроэнтерологи, гепатологи. Пройти обследование можно в лаборатории на базе частной или государственной поликлиники. Анализ мочи на билирубин является скрининговым – при положительном результате необходимо более подробно исследовать функциональное состояние печени.

Когда нужно определять концентрацию желчных пигментов в моче?

Основанием для назначения исследования являются заболевания печени и желчевыводящих путей. Врач может назначить анализ при жалобах на нарушение пищеварения (изжогу, отрыжку, метеоризм). Боли в правом подреберье, УЗИ-признаки патологических изменений в печени могут являться основанием для выполнения этого анализа мочи.

Одним из симптомов, при которых обязательно нужно определить концентрацию желчных пигментов в моче, является ее потемнение (иногда до цвета пива).

Как правильно готовиться к сдаче анализа?

Специальной подготовки не требуется. Мочу следует собирать утром. Необходимо знать, что желчные пигменты разрушаются на свету, поэтому собранный материал нужно хранить в плотно закрытой непрозрачной емкости. Если пациент собирает мочу в домашних условиях, разрешается хранить образец в холодильнике. Для проведения анализа требуется 30–50 мл мочи.

Показатели в норме, и о чем говорит изменение концентрации желчных пигментов в моче

У здорового человека в моче полностью отсутствует билирубин. Положительный результат на билирубин в моче говорит о нарушении его выведения нормальным путем (через печень). Отмечается это при вирусном гепатите, циррозе, при закрытии желчных путей камнем или опухолью поджелудочной железы. В этом случае нужно провести дополнительное исследование состояния печени. Обычно врачи назначают анализ крови на билирубин, АЛТ и АСТ, общий белок, щелочную фосфатазу, а также УЗИ печени и желчных путей.

Уробилиноген всегда определяется в моче здорового человека, нормальная концентрация – 5–10 мг/л. Клинический интерес представляет как повышение, так и понижение его концентрации.

Снижение концентрации уробилиногена свидетельствует о нарушении попадания билирубина в просвет кишечника, что отмечается при обтурации (закупорке) желчевыводящих путей камнем или опухолью. Полностью исчезает этот пигмент из мочи, когда перестает образовываться желчь, например, при тяжелейшем вирусном гепатите или токсическом поражении печени.

Уробилиногенурия отмечается при гемолитической желтухе, при токсических и инфекционных гепатитах, циррозе, инфекционном мононуклеозе, холангитах. Заболевания кишечника (энтериты, запоры), малярия, гемолитическая желтуха также могут привести к уробилиногенурии.

Желчные пигменты в моче позволяют оценить функциональную способность ЖКТ, выявить начальные признаки нарушения органов. У здорового человека насыщенность урины уробилиногеном не превышает 17ммоль/л, а билирубин отсутствует. Изменения концентрации веществ свидетельствует о нарушениях различного происхождения. По характеру увеличения и соотношению субстанций, врач может сказать, на каком уровне произошел сбой.

Что означают желчные пигменты в моче

Желчные пигменты . Вещества способны окрашивать выделения в соответствующий цвет.

В норме билирубин в моче практически отсутствует, не определяется стандартными анализами. Появление данной фракции говорит о билирубинурии и начальных проявлениях гепатобилиарной дисфункции: гепатит, цирроз, опухоль печени. В таких случаях у пациентов урина темнеет, приобретает характерный черно-коричневый цвет пива.

Уробилиноген – трансформировавшийся в кишечнике билирубин, проникает в почки и выводится с мочой. Концентрация вещества небольшая, обеспечивает окрашивание в соломенно-желтый цвет. Субстанция постоянно присутствует в мочевом пузыре, свидетельствует о нормальной работе ЖКТ и выделительной системы. После окисления на воздухе переходит в уробилин, приобретает более темное желтое окрашивание.

Значительное повышение уробилина появляется при увеличении фракций билирубина крови, нарушении обратного всасывания продуктов распада, блоке в кишечнике. Отрицательный тест на уробилин говорит об отсутствии оттока желчи из печени или тяжелом поражении гепатоцитов. Повышение и снижение фракций желчных пигментов неблагоприятные признаки начавшихся нарушений.

Виды

Известны следующие пигменты мочи: билирубин и уробилин. После расщепления гема в крови циркулирует несвязанная фракция билирубина. Данный продукт нерастворим в жидких средах, не проходит через почечный фильтр в мочу. Вещество крайне токсично, нуждается в обезвреживании. После попадания в печень субстрат трансформируется: соединяется с глюкуроновой кислотой, становится гидрофильным, малоопасным. Далее пигмент поступает по желчевыводящим протокам в тонкую кишку. Системой воротной вены небольшая часть билирубина повторно всасывается, а остаток выводится с калом в виде стеркобилина. Порция конъюгированной субстанции попадает в урину в виде уробилиногена, где окисляется и становится уробилином.

Причины появления

В обычном состоянии желчь в моче содержится в минимальных концентрациях, которые могут колебаться в течение суток, но не превышают допустимых пределов. В норме с уриной выделяется только уробилин. Появление связанного растворимого билирубина свидетельствует о патологии. При этом само вещество всегда повышено к крови, значение непрямой фракции может варьировать.

Отсутствие уробилина встречается при воспалении, опухолевой закупорке желчных путей, при нарушении мочеотделения, терминальных поражениях печени.

Видео: Все о билирубине

У взрослых

На практике врачи чаще сталкиваются с нарушениями выведения продуктов распада гема у работоспособного населения. Причины, вызывающие появление билирубина в моче:

• ЖКБ, холестаз;
• инфекции;
• интоксикации, отравления;
• гепатиты, болезнь Боткина;
• цирроз;
• опухоли печеночно-билиарного тракта;
• удаленный желчный пузырь;
• кишечная непроходимость;
• нарушения сердца и сосудов, приводящие к гипоксии паренхимы;
• гипотиреоз.

Уробилин возрастает при следующих состояниях:

1. Заболевания паренхимы печени, когда не происходит повторного захвата билирубина и высокие концентрации пигментов остаются в крови, превышают почечный фильтр и обнаруживаются в моче.
2. Повышенный гемолиз эритроцитов. Помимо физиологического увеличения в период менструации и периода новорожденности, встречается при малярии, пневмонии, кровотечениях различной локализации, нарушениях свертывающей системы, сепсисе.
3. Патологии ЖКТ с усилением всасывания продуктов распада гемоглобина: хронические запоры, непроходимость кишечника.

У детей

Нередко . Явление связанно с физиологической адаптацией: замена фетального гемоглобина, сопровождается повышением распада эритроцитов, возникает желтуха новорожденных. Важно следить за динамикой состояния: быстрое повышение концентрации и появления билирубина в урине свидетельствует о нарушении естественного процесса, появлении патологии.

В раннем возрасте причиной появления пигментов в урине становятся:

• генетические поломки ферментативной трансформации билирубина — Синдром Ротора, Криглера, Дубина –Джонсона;
• нарушения системы крови (геморрагический диатез, болезнь Верльгофа);
• гемолитическая желтуха;
• инвагинация с последующей кишечной непроходимостью.

При беременности

В момент вынашивания плода повышается нагрузка на все органы и системы. Даже у здоровых женщин в моче может определяться увеличение уробилиногена. При этом пациентки жалуются на потемнение урины. В случае, когда имеется патология билиарного аппарата до беременности, возможно усугубление состояния. Дополнительно играют роль усиленная работа сердца и почек, способствующих увеличению ОЦК и концентрации всасываемых веществ.

Контроль уровня желчных пигментов позволяет подсказать наступление обострения. У пациентки в интересном положении необходимо исключить холецистит, вирусный гепатит, пиелонефрит, нарушения свертывающей системы.

Диагностика

Изолированное незначительное потемнение урины обычно не является поводом для беспокойства. Однако при обнаружении следующих признаков необходимо проконсультироваться со специалистом:

• моча темно-коричневого цвета;
• обесцвеченный кал;
• повышение температуры, слабость;
• диспепсические расстройства (тошнота, рвота, нарушения стула)
• кожный зуд;
• нарушение мочеиспускания;
• иктеричность кожи, слизистых;
• боли в правом подреберье;
• появление спонтанных гематом.

Прежде всего, требуется посетить терапевта, для назначения стандартных анализов мочи на выявление желчных пигментов. При обнаружении нарушений врачом определяется вероятная причина состояния. С учетом этого становится ясно, к какому специалисту обратиться за помощью. Болезни крови корректирует гематолог. Гепатиты лечит инфекционист. Нарушения гепатобилиарного тракта – гастроэнтеролог, при необходимости хирург.

Для диагностики назначают:

1. Общий анализ крови для установления анемии при повышении распада эритроцитов.
2. Биохимия крови позволяет определить концентрацию фракций билирубина, щелочной фосфатазы, белка, составить представление о функционировании печени.
3. Гемотест – анализ испражнений на скрытую кровь при подозрении на кровотечение ЖКТ.
4. Определение маркеров вирусных гепатитов при заборе крови.
5. УЗИ органов брюшной полости.

Основной способ выявления пигментов – качественное исследование различных сред организма (урина, кровь, кал). Проводятся специальные пробы на присутствие уробилиногена: Флоранса, Гмелина, Розина, Богомолова. Для реакций применяют йод, азотную и соляную кислоты, которые соединяясь с компонентами желчи, образуют специфическую окраску. В зависимости от интенсивности полученного оттенка лаборант в заключении указывает тип реакции: от слабо (+) до резко положительной (++++).

Количественно установить желчные пигменты помогают тест-системы с реактивом Эрлиха, метод флуоресценции.

Лечение

Перед началом терапии необходимо достоверно установить причину, появления или увеличения продуктов желчи в крови. Сбор жалоб, анамнеза, результатов диагностических тестов поваляет максимально точно определить тип нарушения.

В основном коррекция нарушений гепатобилиарного тракта производят традиционными способами:

1. В обязательном порядке рекомендуется лечебная диета, противопоказан алкоголь и курение.
2. Вирусные гепатиты лечат по специальным алгоритмам.
3. Проводится дезинтоксикация, плазменное очищение крови.
4. Назначают гепатопротекторы, желчегонные средства.
5. Применяется поддерживающая (глюкоза, витамины) и иммунностимулирующая терапия.

Оперативному удалению подлежат опухоли, камни и другие механические препятствия. Оптимальный метод подбирается в зависимости от вида вмешательства, неудачи от консервативной терапии.

Нетрадиционные способы лечения допустимы при наличии патологических желчных пигментов в урине. Обычно используют специальные настои трав с гепатопротекторными свойствами или направленными на усиление желчевыделительной функции. Перед началом применения народных способов терапии необходимо проконсультироваться со специалистом, во избежание перекрестных эффектов лекарственного взаимодействия.

Прогноз и профилактика

При своевременной диагностике и лечения патологий, приводящих к нарушению выведения желчных пигментов, прогноз благоприятный, ведет к выздоровлению и устранению нарушений.

Для предотвращения развития патологий билиарного тракта необходимо:

1. Соблюдать правила личной гигиены.
2. Вести активный здоровый образ жизни, правильно питаться.
3. Своевременно лечить заболевания ЖКТ.
4. Прививаться от гепатита.

Видео : Как понизить билирубин, разжижить желчь.

Уробилин в моче представляет собой химическое вещество, образующееся при многоуровневом распаде молекул гемоглобина и придающее урине желтоватый цвет.

Анализ мочи пациента на желчные пигменты учитывает содержание уробилина (урохрома), так как его критически низкие или предельно высокие концентрации могут свидетельствовать о наличии в организме человека заболеваний.

Часто пациенту сообщают, что у него содержатся уробилиноиды в моче. Ниже проведем расшифровку и рассмотрим, что значит их наличие в анализе мочи.

Уробилиноиды в дословном переводе обозначает: «уробилиноподобные». В медицинской литературе редко используется термин «уробилиноиды», чаще их называют «уробилиновые тела». «Уробилиновые тела» — общее название широкого спектра продуктов метаболизма билирубина — уробилин, соединения мезобилиногена (уробилиноген, стеркобилиноген), стеркобилин и так далее.

Данные химические вещества частично выводятся с мочой, частично – с калом. Первоначально билирубин, являющийся продуктом распада биливердина (образуется в результате распада гемоглобина из эритроцитов), представляет собой один из основных компонентов желчи человека и животных.

В связи с этим, когда говорят о желчных пигментах в моче человека, имеют в виду продукты обмена билирубина. Билирубина в моче в чистом виде вообще не должно быть, как и других белков.

Анализ мочи на уробилиноген позволяет выявить желчные пигменты и своевременно диагностировать наличие патологических процессов в печени, почках, желчном пузыре и так далее.

Цвет урины, содержащей продукты обмена билирубина, становится темнее. Происходит это из-за естественного окрашивания урины пигментами желчи, имеющими желтый и зеленоватый цвет.

Норма уробилиноидов в моче при общих анализах редко определяется в числовом значении, так как их присутствие ничтожно мало, и для полноценного определения возможных патологий используется положительная реакция на химическое вещество.

При числовом определении концентрация уробилиногена в анализе урины в норме не должна превышать 10 мг/л и не должна быть меньше 5 мг/л. Норма уробилиногена в моче у ребенка: 0-2 мг/л. У новорожденных этот уровень может быть значительно превышен, что обусловлено временной физиологической желтухой.

Этиология повышения уровня урохрома

Содержание уробилиногена в моче ребенка в возрасте до трех лет в норме должно быть такое же, как и у взрослого человека, и варьируется от 5 до 10 мг/л.

Концентрация уробилиногена в моче может меняться при повышении нагрузки на почки (употребление диуретических препаратов, диарея, чрезмерное употребление жидкости и т. д.) или при хроническом заболевании (при сбоях в работе печени или кишечника).

Концентрация вещества в урине может варьироваться как в меньшую, так и большую сторону, что при значительном отклонении от нормы, обозначенной в предыдущем разделе, может свидетельствовать о патологии (в частности, печени).

Наличие желчных пигментов в моче может быть обусловлено естественными физиологическими или патологическими процессами в организме человека.

Высокий уровень урохрома: наиболее вероятные патологии

При повышении уробилиногена в моче пациенту нужно назначить дополнительную узкоспециализированную диагностику, направленную на выявление одного из следующих заболеваний/патологических состояний:

• застой желчи. Требуется провести дополнительный анализ мочи на желчные пигменты и направить пациента на УЗИ брюшной полости;
• почечная недостаточность. Дополнительно необходимо провести исследования на белок в моче – при протеинурии уровень уробилиногена часто повышен;
• острые и хронические заболевания печени: гепатит, цирроз, опухоли доброкачественного или злокачественного характера и так далее;
• высокий уровень уробилиногена (желчь в моче) свидетельствует о нарушениях в работе желудка/кишечника, связанных с дисбактериозом.
• высокий уровень уробилиногена может говорить о развитии патологического состояния системы кровообращения (анемия и т. д.), связанного с чрезмерным разрушением эритроцитов.

Низкий уровень или отсутствие уробилиногена

Общий анализ мочи позволяет точно определит наличие или отсутствие уробилиногена в моче. Отсутствие уробилиногена является причиной для направления пациента на узкоспециализированную диагностику с целью выявления одного из следующих заболеваний/патологий:

• холестаз при желчнокаменной болезни, связанный с перекрытием протоков конкрементами;
• заболевания почек, приводящие к нарушению фильтрационной функции данного органа мочевыделительной системы. Наиболее часто диагностируются поражения почечной паренхимы.

В урине ребенка низкий уровень или полное отсутствие уробилиногена является нормой.

Урохром в урине у ребенка

Уробилиноиды в моче у ребенка должны полностью отсутствовать. Если обнаруживаются следы уробилиногена в моче ребенка до 2 мг/л, это является нормой, но они могут свидетельствовать о начале развития физиологической желтухи.

Детям в возрасте до 4 месяцев уробилиноиды в моче несвойственны при условии грудного вскармливания, так как нет предпосылок для образования соответствующих бактерий в организме. Концентрация уробилиноидов у детей старше одного года идентична взрослому человеку.

Норма концентрации уробилиногена при беременности

Моча беременных содержит большее количество желчных пигментов. Изменения при беременности связаны с повышенной нагрузкой на почки, которая проявляется учащенным мочеиспусканием на фоне повышенного употребления жидкости.

В связи с этим допустимая норма концентрации урохрома при беременности повышается до 20 мг/л. У большинства женщин в данный период наблюдается более насыщенный цвет мочи. Важно! Допустимый насыщенный темно-желтый цвет.

Но при появлении коричневого оттенка можно говорить о примеси крови и гноя в моче, что не является нормой, и нужно немедленно обратиться к лечащему специалисту. При этом состояние женщины может оставаться в норме.

Диагностика и лечение заболеваний

При выявлении патологии в первую очередь пациенту рекомендуется корректировка рациона с целью снижения/увеличения выработки желчи.

Основная терапия должна быть направлена на устранение или снижение негативного воздействия на организм заболевания, вызывающего снижение/повышение концентрации желчных пигментов. Самолечение недопустимо. Использование народных методов допускается, только после консультации с врачом.

Уробилиноген (мезобилирубиноген) – продукт восстановления билирубина. Последний представляет собой желчный пигмент, образующийся при расщеплении белков, содержащих гемы.

Таким образом, уробилиногены возникают в результате утилизации эритроцитов. Уробилиноген образуется в условиях кишечника из билирубина, который попал туда вместе с желчью. Под воздействием ферментов и микроорганизмов он окисляется и всасывается снова в кровь. После этого он попадает в почки и выводится вместе с мочой.

Если уробилиноген в моче повышен, и его концентрация превышает 10 мг/мл, говорят о гиперуробилиногенурии. Данное состояние может быть следствием нарушения обратного захвата уробилиногена гепатоцитами, увеличения синтеза предшественников уробилиногеновых тел – билирубина, а также повышения уровня его всасывания в кишечнике. Что это значит мы рассмотрим в этой статье 34.

Что это такое?

Образуется уробилиноген в кишечнике из желчного билирубина (в данном процессе принимает участие кишечная флора). Часть вещества преобразуется в стеркобилиноген, который выводится вместе с фекалиями, а вторая часть всасывается кровью.

Кровь преимущественно проходит через печень, за счет чего ее клетки захватывают уробилиноген и снова преобразуют его в билирубин, а тот уже выводится вместе с желчью. Однако малая часть крови проходит от кишечника по геморроидальным анастомозам, не захватывая печень. То есть, некоторое количество уробилиногена все же попадает в мочу.

Норма уробилиногена в моче

Уробилин в моче у здоровых людей должен содержаться в мизерных нормах. Его настолько мало, что анализы показывают отрицательные результаты. Отсюда ясно, что при нормальном состоянии уробилинов в моче не должно обнаруживаться.

Однако, в моче взрослого человека обязательно должны обнаруживаться, по крайней мере, следы уробилиногена.

Полное его отсутствие возможно в трех случаях:

1. Нарушен процесс почечной фильтрации при тяжелой форме гломерулонефрита, токсических поражениях почек и злокачественных новообразованиях.
2. Желчь не выходит из желчного пузыря в кишечник из-за механической закупорки желчного протока.
3. Препятствием может быть камень или сдавление протока головкой увеличенной поджелудочной железы или опухолью.

Градация по степени повышенности уровня уробилиноидов :

• слабоположительная (+);
• положительная (++);
• резко положительная (+++).

Определять уробилиновые уровни в урине важно, ведь по показателям можно судить о том, как эффективна работа системы мочевыделения. Превышение нормы уробилиноидов называется уробилинурией. Данный фермент повышается при нарушении работы печени или кишечника.

Причины повышенного уробилиногена в моче

В моче обнаружен уробилиноген, что это значит? Увеличение концентрации уробилиногена в моче у мужчин и женщин может указывать на чрезмерную выработку билирубина в печени либо на замедление его утилизации. Подобные симптомы чаще всего возникают при патологиях печени. Другой причиной данного состояния может быть процесс разрушения эритроцитов в организме (гемолиз).

Перечислим основные причины, в результате которых диагностируется высокое содержание уробилиногена в моче :

1. Повышение катаболизма гемоглобина: гемолитическая анемия, внутрисосудистый гемолиз (переливание несовместимой крови, инфекции, сепсис), пернициозная анемия, полицитемия, рассасывание массивных гематом.
2. Увеличение образования уробилиногена в желудочно-кишечном тракте: энтероколит, илеит, обструкция кишечника, увеличение образования и реабсорбции уробилиногена при инфекции билиарной системы (холангиты).
3. Повышение при нарушении функции печени: (исключая тяжелые формы), и , токсическое поражение печени (алкогольное, органическими соединениями, токсинами при инфекциях и сепсисе).
4. Вторичная печеночная недостаточность: после инфаркта миокарда, сердечная и циркуляторная недостаточность, опухоли печени.
5. Повышение при шунтировании печени: цирроз печени с портальной гипертензией, тромбоз, обструкция почечной вены.

В некоторых ситуациях, повышение данного показателя выше нормы не связано с патологией печени, и может возникать по причине недостаточного потребления жидкости, или её чрезмерного выведения. В данном случае содержание пигмента остаётся неизменным, а его концентрация увеличивается исключительно за счёт потери жидкости.

Лечение

Уробилиноген в моче – что это значит? Что делать в данной ситуации? Прежде всего, не нужно паниковать. Отрицательные эмоции и эмоциональный дисбаланс приводят к застойным явлениям в организме, что еще больше усугубит ситуацию. При резкоположительной реакции на уробилиновые тела необходимо обратиться к врачу и возможно пройти дополнительные исследования, которые помогут выяснить истинную причину этой ситуации.

После того, как получены точные результаты, нужно обязательно пересмотреть свой рацион питания и выбрать подходящий диетический режим, который будет щадящим для вашей печени. Не забывайте и о дневном режиме, помните, что самая большая активность печени приходится на период времени с 21.00 до 3.00, но только в том случае, если вы находитесь в абсолютно спокойном состоянии, то есть – спите. Чтобы привести в порядок работу своего организма, просыпайтесь не позже 7 часов, а ложитесь спать – не позже 22.

Настои лекарственных трав также помогут привести организм в норму, наладить работу кишечника и вывести избыток шлаков. Это горькие травы, например, бессмертник, полынь горькая, девясил, пижма, расторопша. Для приготовления лекарственного настоя берут одну большую ложку сухого сырья любой из перечисленных трав и заливают 0,5 л кипятка, настаивают не менее получаса, затем процеживают. Принимать следует до еды по 1/4 стакана.

Желчные пигменты (билирубин, биливердин и др.) образуются при распаде гемоглобина эритроцитов и появляются в моче при желтухах. Моча, содержа щая желчные пигменты, имеет желтовато-коричневое или зеленое окрашивание (характерный признак желтухи).

Проба на билирубин с раствором йода (проба Розина)

К 3 мл мочи осторожно наслоить 1% спиртовый раствор йода или раствор Люголя. При наличии билирубина на границе между обеими жидкостями образуется зеленое кольцо. С нормальной мочой проба отрицатель на.

Проба Гмелина на желчные кислоты

К 1 мл концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке насло ить мочу равный объем. При наличии желчных пигментов на границе наслаива ния образуется зеленое кольцо.

8. Проба Петенкофера на желчные кислоты.

Реакция основана на конденсации желчных кислот с оксиметилфурфуро лом, образующимся под влиянием концентрированной серной кислоты из саха розы. Продукт конденсации имеет красно-фиолетовую окраску.

В пробирку поместить 1 мл мочи добавить 5 капель 5% рас твора сахарозы и осторожно по стенке пробирки наслоить 1 мл концентриро ванной серной кислоты. При наличии желчных кислот на границе наслаивания образуется кольцо красно-фиолетового цвета.

9. Проба Яффе на уробилин.

К 2 мл мочи прибавить небольшую порцию раствора хлористого цинка. При встряхивании появляется хлопьевидный осадок, который растворить в концен трированном растворе аммиака (около 1мл). В норме появляется слабо-зеленая флюоресценция, ярко выраженная при патологии.

10. Качественное определение индикана в моче.

Индикан - калиевая или натриевая соль индоксилсерной кислоты - содер жится в нормальной моче в виде следов. Много индикана содержится в моче травоядных животных, а также в моче человека при усиленном гниении белков в кишечни ке, при запорах и непроходимости кишечника.

В пробирку налить 4 мл исследуемой мочи и прибавить при помешивании равный объем серной кислоты. Затем добавить около 1 мл хлороформа, 1 - 2 капли раствора перманганата калия, закрыть пробкой и несколько раз перевернуть, не встряхивая. Пробирку поставить в штатив и наблю дать интенсивность окрашивания хлороформного слоя в синий цвет 13. Решать ситуационные задачи.

Уметь объяснить принцип метода определения и клинико-диагностическое значение некоторых биохимических показателей 1. Разделение белков сыворотки крови методом электрофореза на бумаге и количественное определение белковых фракций.

Разделение и количественное определение белковых

фракций сыворотки крови методом электрофореза на бумаге.

Принцип метода. Электрофорез – это движение заряженных частиц в поле постоянного электрического тока. Скорость перемещения молекул белков в электрическом поле зависит от величин заряда, молекулярной массы, pH , ионной силы раствора.

Белки сыворотки крови помещают на полоску бумаги, смоченную буферным раствором, через которую пропускают постоянный электрический ток. При pH 8,6 белки сыворотки крови заряжаются отрицательно и под воздействием электрического поля перемещаются к аноду.

Сыворотка крови человека содержит различные белки. С помощью электрофореза на бумаге выделяются 5 фракций - альбумины, α1-, α2-, β-, γ-глобулины.

Клинико-диагностическое значение. Многие патологические состояния сопровождаются количественными изменениями соотношения белковых фракций крови – диспротеинемиями. Уменьшение содержания фракции альбуминов характерно для заболеваний печени за счет снижения белок-синтезирующей функции гепатоцитов. Гипоальбуминемия также сопровождает заболевания почек вследствие потери белка с мочой. Увеличение содержания фракций α1- и α2-глобулинов наблюдается при стрессе, наличии воспалительных процессов за счет белков «острой фазы», при коллагенозах и метастазировании злокачественных новообразований. Фракция β-глобулинов растет при гиперлипопротеинемиях. Фракция γ-глобулинов повышается при иммунных реакциях, вызванных вирусными и бактериальными инфекциями. Снижение γ-глобулиновой фракции может иметь место при первичном и вторичном иммунодефиците.

Порядок выполнения работы

1. Устройство прибора для электрофореза. Прибор состоит из выпрямителя, подающего постоянный ток необходимого напряжения, и камеры для электрофореза. Сама камера состоит из 2-х ванн; в одной из них имеется неподвижная перегородка, куда помещается платиновый электрод (+ анод), а в другой находится электрод из нержавеющей стали (- катод). Между ваннами, заполненными соответствующим буфером, имеется соединительный мост, на который помещают полоски специальной фильтровальной бумаги.

2. Проведение электрофореза. Заполнить обе ванны камеры раствором вероналового буфера с pH 8,6. Буферного раствора в ваннах должно быть столько, чтобы он покрывал неподвижную перегородку, но был ниже подвижных перегородок.

Вставить в ванны электроды. Вырезать из фильтровальной бумаги полосы необходимого размера в зависимости от величины камеры (обычно шириной 4-6 см) и простым карандашом отметить место, на которое впоследствии будет наноситься сыворотка (старт). Смочить эти полоски в вероналовом буфере. Вставить в ванны-камеры соединительный мост. Поместить полоски бумаги на сухие пластинки щипцами, погрузив концы полосок в ванны с буфером, и на заранее отмеченные участки бумаги нанести сыворотку по 0,025-0,005 мл на расстоянии 5-6 см от края моста. Нанесение сыворотки производится со стороны катода.

Рисунок 1. Схема камеры для электрофореза белков на бумаге:

1-стабилизатор; 2-камера для электрофореза; 3-буферный раствор; 4-поддерживающий соединительный мост-электрод; 5-фильтровальная бумага для электрофореза.

После нанесения на бумажные полоски сыворотки камера герметично закрывается крышкой. На крышке камеры расположен прижим блокировки, служащий для включения камеры. Присоединенный выпрямитель подает к камере постоянный ток от 2 до 4 мА при постоянном напряжении 110-160В. Электрофорез проводят при градиенте потенциала от 3 до 8 В на 1 см полосы при комнатной температуре. Хорошее разделение происходит за 18-20 часов.

3. Выключение прибора и выявление белковых фракций. Выключают прибор. Снимают камеры и извлекают бумажные полоски из прибора. Затем каждую полоску помещают в сушильный шкаф на 20 минут при температуре 1050С. При этом происходит фиксация белковых фракций на бумаге. Окраску белков проводят раствором бромфенолового-синего в течение 30 минут, затем промывают электрофореграммы 2% раствором уксусной кислоты. Полученные электрофореграммы сушат на воздухе. Белковые фракции окрашиваются в сине-зеленый цвет.

4. Количественное определение белковых фракций. Окрашенные белковые пятна вырезают, краситель элюируют 0,01 н раствором щелочи. Интенсивность окраски каждой фракции определяют колориметрически на ФЭКе.

Количественное определение белковых фракций на электрофореграмме можно установить двумя способами: путем элюирования краски и фотоколориметрирования и денситометрическим методом.

альбумины 55,4-65,9 %

α1-глобулины 3,4-4,7 %

α2-глобулины 5,5-9,5 %

β-гдобулины 8,9-12,6 %

γ-глобулины 13-22,2 %

Денситометрический метод. В специальном аппарате (денситометре) через электрофореграмму пропускают пучок света, поглощение которого зависит от оптической плотности окрашенных белковых пятен. Свет, прошедший через электрофореграмму, улавливается фотоэлементом и превращается в электрический ток, колебания которого фиксируют на бумажном листе в виде кривой, каждый пик кривой соответствует определенной белковой фракции.

Рисунок 2. Электрофореграмма сыворотки человека.